純化后如何除咪唑？
1，破細(xì)胞，高速離心收上清收集上清（同時(shí)平衡好柱子）；
2，既然你是His-tag，用Ni-NTA之類的柱子，兩次上柱，buffer平衡；
3，低濃度咪唑（5mM）洗5-10柱體積，以洗去雜蛋白；
4，過梯度咪唑（10-500MM），用紫外檢測(cè)儀監(jiān)測(cè)280nm，收下每個(gè)峰；
5，用峰液跑SDS-PAGE，看哪個(gè)峰的蛋白濃度和純度最為理想；
6，脫咪唑以及換buffer、脫鹽，有兩種基本方法：A，透析（經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便）；B，用脫鹽柱（需要有儀器及柱子，更簡(jiǎn)便更省時(shí)）。
關(guān)于您說的蛋白沒有活性的問題，我建議您在脫咪唑之前，就用峰液去測(cè)活性（如果咪唑不影響活性的檢測(cè)手段），一般來講，咪唑不會(huì)對(duì)蛋白的活性有太大影響。如果脫咪唑之前就已經(jīng)沒有活性，那就不是脫咪唑的問題，而是要往前追溯問題。比如，有無移碼、tag對(duì)蛋白性質(zhì)影響如何、破細(xì)胞的方法是否影響蛋白等等。
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