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熒光分析法與吸光光度法有何區(qū)別

2022.7.01

1.原理方面:
相同點(diǎn):吸光光度法和熒光分析法都是分子光譜。
不同點(diǎn):吸光光度法是由分子對(duì)輻射能選擇性吸收由基態(tài)或較低能級(jí)躍遷到較高能級(jí)產(chǎn)生的分子光譜,是分子吸收光譜;而熒光分析法是由分子對(duì)輻射能選擇性吸收由基態(tài)躍遷到單重激發(fā)態(tài),當(dāng)由其第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)回到基態(tài)各振動(dòng)能級(jí)間的躍遷所產(chǎn)生的分子光譜,是分子發(fā)射光譜。
2.儀器方面:
相同點(diǎn):它們都有光源、單色器、液槽、檢測(cè)器和信號(hào)顯示器五部分組成。
不同點(diǎn):熒光光度計(jì)采用垂直的計(jì)量方式,在與激發(fā)光垂直的方向測(cè)量熒光以消除透射光的影響。熒光光度計(jì)有兩個(gè)單色器,一個(gè)是激發(fā)單色器,置于液槽前,用于獲得單色性較好的激發(fā)光;另一個(gè)是發(fā)射單色器,置于液槽和檢測(cè)器之間,用于分出某一波長(zhǎng)的熒光,消除其它雜散光干擾。熒光光度法可以增大發(fā)光強(qiáng)度來(lái)提高靈敏度,但是習(xí)慣光度法測(cè)的是吸光度,測(cè)定靈敏度不會(huì)提高。

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