蛋白過鎳柱純化的原理和步驟是什么
步驟是：過柱子前可以選擇Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化鎳，一個(gè)柱長(zhǎng)體積就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，給蛋白提供最適的環(huán)境，我一般平衡4個(gè)柱長(zhǎng)，然后蛋白上樣，你可以讓他自己掛，這樣掛柱子的效果好一些，如果流速太慢，可以加個(gè)恒流泵，但是一定不能太快，太快掛柱效果差，當(dāng)然你也可以選擇循環(huán)掛柱，就是恒流泵的一頭接你裝蛋白的燒杯，從柱子中留下來的液體還用同一個(gè)燒杯接回去。掛完之后，按理想來講，你的蛋白在Ni柱中與Ni就結(jié)合了，雜蛋白多數(shù)在燒杯里，留下來了，當(dāng)然肯定有少量雜蛋白也掛上了，這時(shí)候你要梯度洗脫，拿咪唑和你的buffer配，一般從0 20mM 40mM。。。。100mM這樣洗脫（當(dāng)你不知道你的蛋白大概在什么時(shí)候出來的時(shí)候）我指的是咪唑的終濃度。咪唑加入之后，會(huì)和蛋白爭(zhēng)奪與Ni的結(jié)合位點(diǎn)，雜蛋白、你的目的蛋白，會(huì)在不同的濃度被洗脫下來，洗完之后，你可以用200mM咪唑洗柱子，清理一切蛋白，然后平衡幾次，是否選擇重生你自己定咯~然后放上20%乙醇保存柱子就可以咯~
過的蛋白用不同的管子收下，然后SDS-page檢測(cè)在哪個(gè)管子里。
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