帶HIS蛋白用鎳柱純化后的保存問題
1.
蛋白的保存很大程度上依賴于蛋白本身的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，其次和保存條件優(yōu)化有關(guān)；
2.
盡量避免蛋白的反復(fù)凍融，這會(huì)對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)和活性造成破壞；
像你說到的第二天就要用，根本沒必要放在-70℃低溫，一般來講，盡量安排好實(shí)驗(yàn)周期，在3天內(nèi)用完蛋白（4℃保存）是理想條件；
3.
如果不得不保存，要分裝，留下馬上就用的放在4℃，其他放低溫，每次取1只；如果有凍干機(jī)，凍成干粉再放到-70比液態(tài)低溫更好，再溶解也會(huì)好很多（但很多蛋白還是會(huì)有失活問題）；
4.
關(guān)于保護(hù)劑，如果蛋白穩(wěn)定性不強(qiáng)，一般會(huì)加甘油（5%-50%濃度）和疊氮鈉（抑菌），這樣一來，取出時(shí)，不得不做透析或脫鹽，以去除甘油和疊氮鈉，會(huì)帶來損失，相比而言，凍干粉就好很多；
5.
關(guān)于咪唑的去除問題，如果確信咪唑的存在對(duì)你后續(xù)的實(shí)驗(yàn)沒影響，可以不去；但實(shí)際上，很多實(shí)驗(yàn)都會(huì)受到咪唑的影響，或者說一旦實(shí)驗(yàn)有疑問，你就無法判定是否是因?yàn)檫溥?，所以建議你去咪唑，去咪唑的方式包括：透析、濃縮管離心、脫鹽柱。個(gè)人認(rèn)為，去除效率、最省時(shí)、蛋白回收率最高的辦法是脫鹽柱。
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