β-葡聚糖的測(cè)定方法
β-葡聚糖含量的測(cè)定方法,大致可歸納為如下幾類:
(1)粘度法:其原理是大麥抽提液的粘度主要由β-葡聚糖產(chǎn)生(Burnett,1966;White等,1983)。這種方法可靠性較差,因?yàn)椴煌瑏碓吹摩?葡聚糖的分子量不同;而在葡聚糖含量相同時(shí),分子量較大者產(chǎn)生的粘度較大,這樣β-葡聚糖粘性的大小并不完全取決于其含量,也取決于分子量大小(Sanlinier等,1994)。另外,抽提條件對(duì)其粘度有明顯的影響。
(2)沉淀法:其原理是利用特定的鹽或有機(jī)溶劑沉淀抽提液中的β-葡聚糖(Wood,1986)。該方法的局限性在于抽提不能完全排除其它物質(zhì)的干擾。在高溫下抽提時(shí),抽提液中含有其它成分如淀粉等,因而干擾測(cè)定的結(jié)果。
(3)酶法:Anderson等(1978)采用特定的β-葡聚糖內(nèi)切酶得到寡糖,經(jīng)酸解后采用葡萄糖氧化酶/過氧化酶試劑測(cè)定葡萄糖的含量。此法后經(jīng)Henry等(1988)修改為測(cè)定還原糖的含量,這樣雖然精確性和可靠性有所降低,但因測(cè)定更為迅速而實(shí)用性明顯提高。另外,Martin等(1981)和鄭祥建等(1995)用纖維素酶測(cè)定谷物中β-葡聚糖的含量。這主要根據(jù)纖維酶不能分解微晶纖維素,而谷物中的纖維素多為微晶狀,因而不至于干擾β-葡聚糖的測(cè)定結(jié)果。由于酶法不需要抽提,選用的酶為特定的,因而精確性和可靠性較高。
(4)熒光法:主要是利用熒光物質(zhì)(Calcoflour)可與β-葡聚糖特異性結(jié)合,而與其它多糖如纖維素、戊聚糖的親和力很弱這一特性進(jìn)行測(cè)定。Wood等(1984)利用此法測(cè)定了燕麥的β-葡聚糖含量。Sendry等(1989)則利用改進(jìn)的Calcoflour-FIA法測(cè)定了啤酒和麥芽汁的β-葡聚糖含量。由于此法操作簡(jiǎn)單,可進(jìn)行大批量的樣品測(cè)定,因此有較好的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值
(5)剛果紅法:根據(jù)剛果紅與β-葡聚糖結(jié)合具有高度專一性,將剛果紅加入樣品溶液中,在一定溫度下準(zhǔn)確反應(yīng)一定時(shí)間后,測(cè)定其吸光度,根據(jù)β-葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)曲線可知樣品中β-葡聚糖的含量。