凝血實驗的標準化問題（一）
摘要 對ICSH、ICTH或美國國家臨床生物化學委員會（NCCLS）等國際以文件形式公布的有關凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原測定等三項實驗的標準化及其重要性作了簡單敘述。
關鍵詞： 凝血酶原時間 活化的部分凝血活酶時間 纖維蛋白原 標準化
由于血栓與止血實驗的特殊性，因此迄今僅有凝血酶原時間（prothrombin
time,PT）、活化的部分凝血酶時間（activated partial thromboplastin
time,APTT）和纖維蛋白原（fibrinogen,Fg）等三項實驗有了標準化的試劑（如PT）、標準品（如Fg）、質控品和統(tǒng)一的報告形式等；其他，如血小板功能、抗凝因子和纖溶成分等檢測尚缺乏成熟的標準化方案。本文僅就經(jīng)國際血液學標準化委員會（ICSH）國際血栓與止血委員會（ICTH）或美國國家臨床生物化學標準委員會（NCCLS）等國際組織以文件形式公布的有關PT、APTT和Fg三項實驗的標準化問題作一簡介。
一、標準化和質量控制的重要性
所謂血栓與止血檢測方法的標準化和質量控制，是指采用統(tǒng)計學原理，運用規(guī)范的物理、化學、生物學的方法，對血栓與止血實驗的技術、操作、儀器、試劑和標本等項的質量水平，進行合理的管理、檢測和評價，以標準化和質量控制來堵絕誤差，提高實驗的精密度、準確性和可靠性。標準化和質量控制的重要性在于
1.為臨床診治提供可靠的依據(jù)：實驗結果的可靠性是臨床診治疾病的重要依據(jù)和條件。實驗結果若為假陽性就會造成誤診、誤治；若為假陰性就會造成漏診、漏治；實驗結果偏高或偏低都會影響患者的診斷、鑒別診斷以及影響醫(yī)師對病情和療效的判斷。
2.提高血栓與止血基礎研究的效率和價值：血栓與止血基礎研究的形式就是進行各種實驗。實驗可靠性好，就能揭示血栓與止血的客觀規(guī)律，甚至可帶來重大理論突破及（或）社會、經(jīng)濟效益；若實驗可靠性差或有錯誤，則會造成假象或錯誤理論。
3. 有助于人群健康調查和建立血液學參數(shù)的正常范圍：為了解一定人群的健康水平，建立具有廣泛意義的血液學參考值的范圍須進行較大規(guī)模人群的健康調查，健康調查必須要有實驗結果的可靠性作保障，不然會導致不準確或錯誤的結果，故質量控制對群體醫(yī)學也有重要意義。
總之，血栓與止血實驗室的質量控制，從一定程度上反映一個國家，一個地區(qū)，一個單位血栓與止血醫(yī)療水平和研究水平的高低。因此，應倍加重視。
二、 凝血酶原時間（PT）的標準化
自1935年Quick創(chuàng)建凝血酶原時間（prothrombin
time,PT）測定方法以來，迄今仍然
是檢查外源凝血系統(tǒng)諸因子及相關抑制物的重要篩選試驗，PT也是目前口服抗凝劑治療的主要手段。但是，PT測定受多種因素影響，必須對它進行標準化和質量控制，以提高PT檢測的精密度、準確度和可靠性。
（一）凝血酶原時間（PT）的標準化問題
1.組織凝血活酶標準化：應用的國際參考品（international reference preparation IRP），有下列幾種：
（1）單一組織凝血活酶國際參考品：是一種組織提取物的生理鹽水懸液制劑。WHO在英國使用的統(tǒng)一標準的“英國比較凝血活酶”（British
comparative thromboplastin,BCT）為基礎，制備WHO的原級凝血活酶參考品（primary reference
preparation），如人腦組織凝血活酶，編號67/40。同時又以BCT67/40為基礎標化了次級參考品（secondary
reference
preparation）。如牛腦組織凝血活酶，編號為68/434；兔腦為70/178。后來WHO還公布了一些次級組織凝血活酶參考品，如人腦或胎盤制劑，如BCT/253；兔或兔、猴組織混合制劑，如RBT/79等。
（2）復合組織凝血活酶國際參考品：它是組織提取物的生理鹽水懸液中加入適量的纖維蛋白原、因子V 和氯化鈣組成的制劑，如牛組織凝血活酶OBT/79等。
目前世界各國都廣泛應用WHO的這些參考品來校正本國或本地區(qū)制備或生產(chǎn)的組織凝血活酶參考物。這樣使世界范圍內有了多種組織凝血活酶參考品。
2.組織凝血活酶工作制劑（working preparation,WP）的國際敏感度指數(shù)
（international
sensitivity
index,ISI）由于不同組織凝血活酶對凝血因子的敏感性不同。為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測PT中能得到同樣的結果，必須要制定一個共同的敏感性指標。這就需要通過自制的試劑與國際參考品（IRP）進行比較，然后得出一個校正值。具體的方法如下：
（1）用國際參考品（IRP）標定國家、地區(qū)或本實驗室的參考制劑（reference preparation,RP）。
（2）用實驗室參考制劑（RP）標定工作制劑（WP）。
1）標本：2份正常人血漿和6份口服抗凝劑達6周的患者血漿，連收10天，共60份標本。
2）測定：按一定順序進行測定，每份標本重復測定2次。將PT測定的結果（秒）點在雙 對數(shù)坐標紙上，橫坐標代表WP的PT測定結果，縱坐標代表RP的PT測定結果，畫出最佳的各點擬合直線，得出定標曲線，通過WP/RP比值，或回歸方程求出斜率b。
3）計算WP的ISI值：
ISI值愈接近于1.0，表明組織凝血活酶試劑愈敏感，因此，生產(chǎn)和出售組織凝血活酶試劑的廠商，必須在產(chǎn)品上標有ISI。
3.PT測定結果的報告方式：理論上，無論何種組織凝血活酶，只要標有ISI，就可與國際參考制品進行對比校正，并可用同一種計量單位報告。1985年ICSH和ICTH推薦以PT監(jiān)測口服抗凝劑的報告方式是國際正?；嚷剩╥nternational
normalizde ratio,INR）。INR的計算公式如下：
在用INR后，各種敏感性不同的組織凝血活酶均可得到相同的INR值。
4.儀器特有有ISI：上述PT根據(jù)報告方式適用于手工法（試管傾斜法）測定PT。但是手工法與儀器法以及儀器法與儀器法測定PT的INR之間，仍有差異。研究表明，在ACL、Cobas
Fibro和Coaga-Pet三臺自動化儀器上，使用同一種ISI為1.12的Thromborel
S試劑，測定PT的均值分別為10.7秒、12.1秒和11.1秒。但若以同一ISI值計算INR，得出的數(shù)值也存在著不同程度的差異。為此，專家們提出建議：同一組織凝血活酶試劑用于不同儀器時，可用所謂的“儀器特有的ISI”（instrument
specific ISIs）或稱區(qū)域性ISI（Local
ISI）來計算INR。每臺儀器所使用的凝血活酶試劑都應該有特定的ISI值，重新標定ISI值的做法是購買標有INR的凍干血漿，然后在自己的儀器上再標定所使用凝血活酶試劑的ISI值，這樣才可使病人的INR具有可比性。
